Blog Loraine: Ontwerp van Primers

Marjoke Koster/ april 18, 2018/ iGEM Loraine/ 0 comments

Deze week legt Loraine in haar blog het een en ander uit over het maken van primers. Primers worden gebruikt om een polymeraseketttingreactie (PCR) uit te voeren. PCR is een veelgebruikte techniek waarbij een zeer kleine hoeveelheid DNA geamplificeerd kan worden. Dit wordt als volgt gedaan:

 

Afbeeldingsresultaat voor PCR

Afbeelding 1: Proces PCR (ResearchGate)

Tijdens een PCR reactie worden verschillende stappen ondergaan. Als eerst is de denaturatiestap bij 95°C. Hier worden de waterstofbruggen, die de dubbele helix aan elkaar verbinden, verbroken. Zo ontstaat enkelstrengs DNA. Vervolgens wordt de temperatuur naar 50-70°C verlaagd om ervoor te zorgen dat primers kunnen binden, annealingsstap. Deze primers binden aan hun complementaire streng. Om ervoor te zorgen dat deze primers goed binden is een goed ontwerp nodig (zie blog voor ontwerp). Daarna wordt de temperatuur weer te verhoogd naar 72°C zodat Taq polymerase kan binden. Taq polyermase zorgt ervoor dat de juiste dNTP’s worden ingebouwd en zo het DNA weer dubbelstrengs wordt gemaakt. Deze stap wordt de verlengingsfase genoemd. Het resultaat wat verkregen wordt is een verdubbeling van het dubbelstrengs DNA in vergelijking met het begin.

 

Om meer van het ontwerpen van primers te weten te komen klik hier!


Geschreven door Marjoke Koster

Leave a Comment

Het e-mailadres wordt niet gepubliceerd. Vereiste velden zijn gemarkeerd met *

You may use these HTML tags and attributes: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <s> <strike> <strong>
*
*